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本试剂盒是一种快速简单、可用于聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。该方法检测灵敏度比EB高达200倍，能检测到10ng的DNA条带，常用于检测SSR标记、SNP标记等。

• 由于染色非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。
  
• 需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。
  
• 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75～1mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。
  
• 本说明书所指的常温温度为20～25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。
  
• 基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。

• 漂洗步骤：电泳结束后，凝胶中加入100mL MilliQ级水，在摇床上常温摇动2分钟，摇速为60～70rpm；重复此步骤1次。
  
• 染色步骤：
  • 染色：弃水，加入100mL即用型染色液，在摇床上常温摇动5分钟，摇动速度为60～70rpm。
    

    配制100mL即用型染色液
    超纯水	79mL
    试剂A-增敏液（10×）	10mL
    试剂B-加速液（10×）	10mL
    试剂C-染色溶液(100×)	1mL

    注：即用型染色液配制后需在20分钟内使用。
    
  • 水洗涤：弃原有溶液，加入100mL MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动15～20秒，摇动速度为60～70rpm。
    注意：水洗涤的时间不能超过20秒。
• 显色步骤：弃水，加入100mL显色液，在摇床上室温摇动3～10分钟，直至出现比较理想的预期核酸条带，摇动速度为60～70rpm。
  

  配制100mL显色液
  超纯水	89.8mL
  试剂D-基本显色液(10×)	10mL
  试剂E-显色加速液(500×)	0.2mL

• 终止步骤：弃显色液，加入100mL MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动3～5分钟，摇动速度为60～70rpm。
  
• 保存：可在MilliQ级纯水中保存；或采用适当的方式制备成干胶。

• 背景太深：
  
  • 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。
    
  • 水的纯度太低。需使用大于16MΩ·cm的高纯度水。
• 核酸条带非常浅：
  
  • 染色后水洗涤时间过长。在染色溶液染色后需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过20秒，否则会导致过多的染色离子被洗去，导致检测灵敏度下降。
    
  • 显色加速液（500×）失效。显色加速液（500×）不能低温保存，低温保存会导致加速液失效。
• 凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹：
  
  • 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
    
  • 用于染色的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于染色，并注意避免各种可能的污染。
    
  • 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
    
  • 有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。